1. Sanger測(cè)序(鏈終止測(cè)序)
工作原理:
DNA復(fù)制:首先,將待測(cè)序的DNA片段通過PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增。
終止子添加:在DNA復(fù)制過程中,使用帶有不同終止子的核苷酸(ddNTPs)。
鏈終止:當(dāng)ddNTPs加入時(shí),DNA鏈的合成終止,因?yàn)樗鼈儧]有3羥基,不能與下一個(gè)核苷酸連接。
電泳分離:將所有新合成的DNA鏈進(jìn)行電泳分離。
讀取序列:通過檢測(cè)每個(gè)DNA鏈的終止點(diǎn),可以確定每個(gè)核苷酸的序列。
2. 測(cè)序通量測(cè)序(二代測(cè)序)
工作原理:
片段化:將DNA片段化成小片段。
文庫構(gòu)建:將片段化的DNA連接到適配體上,形成文庫。
并行測(cè)序:使用熒光標(biāo)記的核苷酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并在每個(gè)循環(huán)中讀取序列。
序列讀取:通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來確定每個(gè)核苷酸。
常見的二代測(cè)序技術(shù)包括:
Illumina測(cè)序:基于測(cè)序通量,使用測(cè)序芯片,通過熒光信號(hào)讀取序列。
ABI SOLiD測(cè)序:使用合成測(cè)序,通過檢測(cè)化學(xué)信號(hào)讀取序列。
Ion Torrent測(cè)序:使用半導(dǎo)體傳感器,通過檢測(cè)離子流讀取序列。
3. 單分子測(cè)序(三代測(cè)序)
工作原理:
單分子檢測(cè):直接在單個(gè)DNA分子上進(jìn)行測(cè)序,而不是像二代測(cè)序那樣先進(jìn)行片段化。
實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè):在DNA復(fù)制或合成過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),可以同時(shí)讀取多個(gè)堿基。
信號(hào)檢測(cè):通過檢測(cè)熒光信號(hào)或離子流等來讀取序列。
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