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PCR技術(shù)類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。這個(gè)反應(yīng)過(guò)程在PCR反應(yīng)容器中進(jìn)行，隨著基因擴(kuò)增儀的不斷發(fā)展，其反應(yīng)容器也經(jīng)歷了從1.5ml到0.2ml (0.25m1）的離心管逐步發(fā)展成PCR專(zhuān)用的薄壁的0.2ml，0.1mlpcr管。隨著pcr擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)量的提高，逐步形成了PCR條、PCR板高通量的基因擴(kuò)增容器。
PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成
模板DNA的變性：
模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備。
模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：
模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右后,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。
引物的延伸：
DNA模板——引物結(jié)合物在Taq的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
PCR技術(shù)的基本原理
該技術(shù)是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴(lài)于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。
DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來(lái)啟動(dòng)合成，通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環(huán)境下，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此為起始點(diǎn)，沿模板5′→3′方向延伸，合成一條新的DNA互補(bǔ)鏈。
如何選擇PCR管
1、材質(zhì)：PCR 耗材一般都是 PP 材質(zhì)，因?yàn)?PCR/qPCR 耗材通常會(huì)與試劑或樣品直接接觸，表面不易于粘附生物分子，有良好的化學(xué)耐性及溫度耐受性。
2、PCR 管/板體積：依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求選用合適的產(chǎn)品。單管和聯(lián)管是兩種最常用的形式。
3、管蓋選擇：?jiǎn)喂芎瓦B管都有平蓋和凸蓋之分，而平蓋和凸蓋各有優(yōu)點(diǎn)。平蓋適用于熒光定量PCR。
4、管壁厚度：管壁厚度會(huì)直接影響熱傳導(dǎo)率，極薄的壁厚可優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時(shí)間。進(jìn)一步減少了熱障，從而帶來(lái)更快，更穩(wěn)健的反應(yīng)。
5、顏色：PCR板通常可提供多種不同的顏色形式，透明的 PCR 管更有助于進(jìn)行樣品分類(lèi)管理。白色 PCR 產(chǎn)品可最大程度地反射熒光信號(hào)，減少孔間信號(hào)交叉污染，可優(yōu)化實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的結(jié)果。不同品牌儀器，由于熒光檢測(cè)器位置設(shè)計(jì)不同，請(qǐng)參考生產(chǎn)廠家推薦的耗材。
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