真空采血管的原理是將有頭蓋的采血管試管預先抽成不同的真空度，利用其負壓自動定量采集靜脈血樣，采血針一端刺入人體靜脈后另一端插入真空采血管的膠塞。人體靜脈血液在真空采血管內部，在負壓的作用下，通過采血針抽入血樣容器，在一次靜脈穿刺下，可以實現多管采集而不發生泄露。連接采血針的內腔體積很小，對采血體積的影響可以忽略，但發生逆流的機率相對要小些，如其內腔體積較大會消耗一部分采血管的真空度，從而降低其采集量。
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